small/microRNA文库制备试剂盒能有效去除引物二聚体，并在同样数据量中获得更多种类的小RNA。具有单一试管反应、一天工作流程的特点。整个流程从总RNA开始，经过接头连接、反转录、PCR和切胶回收的过程，可构建适合Illumina测序仪的small/microRNA文库。通过优化实验流程，有效减少了接头的二聚体，可以从最少10ng 总RNA中成功完成文库构建，同时有效降低了连接反应的偏好性（bias），使得客户能够在同样的测序深度来发现更多的小RNA和microRNA，产生更好的科研发现。该产品可被广泛应用于分析各类临床样品（如FFPE样品和血清/血浆样本）的总RNA。
常见问题解答
1. 你们是否处理过血清样本，对于血清样本你们是否有什么建议？需要多少血清能够提取出足够建库的total RNA？
我们处理过大量血清样本，有优化过的total RNA纯化的流程。通常0.5－1ml血清就可以得到建库足够的total RNA。当然，这也和血清样本的保存状况有关。
2. 你们的barcode序列在哪个位置？barcode有多少种？
我们的barcode序列存在于PCR 引物上，有48种。
3. 在实验过程中比较重要的步骤是哪几个步骤？
只要样本中存在小RNA，按照我们的protocol操作一般是不会出现问题的。需要注意的只有一点：我们建议大家在建库时做一个不加样本的负对照，这样可以清晰的观察到小RNA的条带电泳的位置，并和可能产生的引物二聚体区分，这样不会错误回收引物二聚体片段。胶尽量跑远，割胶前后都要照相。不只一条条带时分别切胶回收等也都是减少无用数据的方法。
4. 你们两端的接头加起来长度是多少？所切的片段大小是多少？
micro RNA试剂盒5’和3’接头加起来长度是118bp。在切胶回收的时候，会切取140bp-160bp之间的片段。建议做阴性对照，这样可以清楚的识别出所需要的小RNA。
5. 在高通量测序中，小RNA 建库过程中是通过什么方式来减少引物二聚体的形成的？
这是我们小RNA文库制备的试剂盒的另一个主要优势：在小RNA与3’接头连接后，加入RT-primer。RT- primer可以与3’接头互补结合，形成RNA：DNA双链杂合体。这些双链杂合体不能作为RNA连接酶的底物，和后期加入的5’接头连接，从而减少了引物二聚体的形成。
6. 在高通量测序中，小RNA 建库过程中怎么去除mRNA及rRNA的？在哪步去除？
小RNA 建库过程中mRNA和rRNA不需要去除，因为它们不干扰整个反应。在小RNA 接头连接的时候，所用的RNA连接酶对于长的片段的连接效率低，两端同时连上接头的品种大多数是小RNA。少数掺入的mRNA或rRNA会因分子量的不同，在根据片段长度切胶纯化的过程中，自然而然地去除了。如果mRNA存在降解，并且降解的mRNA条带在小RNA条带附近，在测序结果中会看到这些降解mRNA的存在。
7. 在高通量测序中，small RNA文库构建是怎么解决序列偏好性（bias）的？
这是我们小RNA文库制备的试剂盒的主要优势之一：在5’接头的连接序列处序列进行了调整，有效去除了序列偏好性。在相同的数据量下，可以找到更多种类的小RNA，去发现别的技术可能丢失的信息。
8. 在高通量测序中，small RNA 文库构建是从total RNA起始的吗？一般 total RNA 需要的量是多少？最低起始量是多少？
small RNA 文库构建是从total RNA起始的。在建库中，一般total RNA的用量是1ug，最低起始量是10ng。small RNA 建库的关键之处是提取的RNA中是否有small RNA，及含有的small RNA 的多少。不同物种不同样品提取的small RNA的含量都不同，一般情况下，样品起始量为1ug total RNA，PCR进行12个循环。
